摘要:

    目的观察大豆异黄酮对负载于脱细胞羊膜上的软骨细胞增殖及其胰岛素样生子因子-1（IGF-1）mRNA基因表达的影响,为组织工程软骨的临床应用奠定基础。方法无菌条件下酶消化法分离、培养新生兔软骨细胞;酶消化法和物理法无菌制备脱细胞羊膜;取第三代软骨细胞接种到脱细胞羊膜上。实验组分别加入含10^-9、10^-8、10^-7mol/L的大豆异黄酮DMEM/F-12培养液,对照组为DMEM/F-12培养液。亚甲蓝染色观察羊膜经酶消化法结合物理法脱细胞的程度、倒置显微镜下观察分离的软骨细胞及其复合到羊膜上的形态,甲苯胺蓝染色观察软骨细胞与脱细胞羊膜的复合。MTT法检测各组软骨细胞增殖率,RT-PCR方法定量检测各组软骨细胞IGF-1 mRNA基因表达量。结果原代分离、贴壁的软骨细胞多呈三角型、梭型,培养至5 d时,铺满瓶底,呈＂铺路石＂状。亚甲蓝染色显示羊膜脱细胞后膜上未见异染蓝色细胞。第三代软骨细胞接种到脱细胞羊膜1 d后,可见部分软骨细胞伸出伪足,细胞呈圆形或三角形。甲苯胺蓝染色显示软骨细胞复合在脱细胞羊膜上4 d后,细胞形态无明显改变,形态多为三角型和梭型,基质蓝染,细胞核呈深蓝色。10^-9、10^-8、10^-7mol/L 3个浓度的大豆异黄酮在软骨细胞接种到脱细胞羊膜上4 d后均能促进负载于羊膜上的软骨细胞的增殖,并且10-7mol/L浓度的大豆异黄酮明显高于对照组（P〈0.05）。RT-PCR结果显示大豆异黄酮可促进软骨细胞表达IGF-1 mRNA,表达量明显高于对照组（P〈0.05）,且具有一定的剂量依赖性。结论大豆异黄酮可促进负载于脱细胞羊膜上的软骨细胞的增殖及其IGF-1 mRNA的表达。