补肾活血汤石油醚提取物对BMSCs迁移过程中Wnt5a/PKC通路的影响
作者:
罗辉
[1]
吴志方
[1]
沈玮
[1]
胡流超
[1]
王斌
[1]
余丽娟
[2]
罗毅文
[1]
关键字:
补肾活血汤
信号通路
体外迁移
骨髓间充质干细胞
Wnt5a
PKC
摘要:
目的 探讨补肾活血汤(熟地黄、菟丝子、补骨脂,等)石油醚提取物对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的迁移作用及相关机制.方法 全骨髓贴壁法培养BMSCs,取第3代细胞用于实验,采用流式细胞仪检测细胞表面抗原,细胞划痕、Transwell实验观察补肾活血汤石油醚提取物0、25、50、100、200μg/mL剂量组的细胞迁移能力,Western blot和RT-PCR检测Wnt5a、蛋白激酶C(PKC)表达情况.结果 第3代BMSCs表面抗原CD29、CD90、CD44表达阳性,而CD45表达阴性;细胞划痕6h及12h后,药物各剂量组细胞迁移速度明显高于空白组(P<0.05,P <0.01);Transwell实验中100 μg/mL补肾活血汤石油醚提取物为促细胞迁移最佳剂量,差异有统计学意义(P<0.01);RT-PCR结果显示与空白对照组比较,药物各剂量组的Wnt5a mRNA水平均升高(P<O.05,P<0.01),而与空白对照组的PKC mRNA水平比较,药物只有100μg/mL剂量mRNA表达水平升高(P<0.01);Western blot结果表明药物组各剂量的Wnt5a、PKC蛋白表达较空白对照组都明显升高(P<0.01),均且以100 μg/mL剂量最高(P<0.01).结论 补肾活血汤石油醚提取物可以促进BMSCs体外迁移,其作用机制可能与Wnt5a/PKC信号通路有关.